微生物检测标准操作程序

1.0目的

制定用于微生物测定的测试程序,以确定被测药物的效力。

2.0范围

该SOP应适用于微生物实验室。

3.0责任

微生物学家
 

4.0问责制

部门主管 

5.0程序

5.1注意事项

5.1.1所使用的玻璃器皿/杯r应进行消毒。
5.1.2接种时,琼脂的温度应在45 – 50°C之间。
5.1.3每次使用前后都要彻底清洁所有设备。
5.1.4对于化验瓶,请使用以下尺寸的不锈钢或瓷瓶,每个尺寸的公差为±0.1毫米:外径8毫米;内径6毫米,长度10毫米。

5.2测试程序

5.2.1根据SOP
5.2.2制备磷酸盐缓冲液,准备用于测定的培养基。
5.2.2.1准备待测抗生素所需的磷酸钾缓冲液。该缓冲器被制备后灭菌,并且在每种情况中指定的pH值后的pH 灭菌
5.2.2.2 0.1 m,pH 7.0的磷酸钾缓冲液–将13.6 g磷酸氢二钾和5.0 g磷酸二氢钾溶解在1000 ml水中。用18 N磷酸或10 N氢氧化钾调节pH值为7.0±0.2。

5.3标准的制定

要制备储备溶液,请在该表中指定的溶剂中酌情溶解一定量的准确称量的给定抗生素的USP参考标准品/工作标准品,或一小瓶USP参考标准品的全部内容物,然后如所示稀释至所需浓度。存放在冰箱中并在指定的期限内使用。在检测当天,从储备溶液中制备五种或更多的测试稀释液,连续溶液的浓度逐步增加,对于圆柱板检测,通常以1:1.25的比例增加。使用指定的**终稀释剂和序列,以使中间或中间值具有指定的浓度。

5.4样品制备

从可用于待测制剂的信息(“未知”)中,为它分配每单位重量或体积的假设效价,并在此假设下,在检测当天准备每种试剂所指定的储备溶液和测试稀释液抗生素,但**终稀释剂与USP参考标准所用的相同。采用五种标准液含量的测定法,在假定浓度等于标准液中值含量的情况下,仅需要一种未知液即可。

5.5接种物的制备

5.5.1用3 ml无菌蛋白ept盐水和无菌玻璃珠从**近生长的生物体倾斜或培养物中去除生长物。
5.5.2将250 ml大豆消化琼脂培养基的表面接种在Roux瓶的平坦面上。
5.5.3借助无菌玻璃珠将悬浮液均匀地铺在琼脂表面上,并在上述温度下孵育。孵育完成后,通过收集50 ml培养基35中的表面生长来制备储备悬浮液
。5.5.4确定稀释因子,该稀释因子将在约530 nm处产生25%的透光率。
5.5.5对于圆柱板分析,通过试验确定接种物中掺入的母液悬浮液的比例从图中所示的体积开始,可以令人满意地划分抑制区,并给出可重现的剂量关系。通过将一部分原液悬浮液添加到已融化并冷却至45至50的足够量的琼脂培养基中,并旋转以获得均匀的悬浮液,来制备接种物。

5.6程序

5.6.1在圆柱板分析中,基本比较限于板内区域直径测量值之间的关系,不包括板在制备和后续处理中的变化。
5.6.2圆筒板法
在培养基35中加入约1毫升如上制备的接种物,将培养基倒入无菌培养皿中并使其硬化。
5.6.3两级析因分析。
5.6.3.1在四个平板上分别准备平行稀释液,其中包含2个水平的标准品(S1和S2)和未知物(U1和U2)。用不同的测试稀释液,标准溶液和未知溶液分别填充其四个量筒。
5.6.3.2将平板在30-35°C的直立位置孵育24至48小时。
5.6.3.3将板在室温下直立,并测量抑制区的直径。
5.6.4效价估算将
每个稀释区的直径求和,并根据以下公式计算样品的效%(以标准物为单位):
效%=对数(2.0 + log I)
其中a可能具有正值或负值,应代数使用,
其中a = (U1 + U2)-(S1 + S2)
                  (U1 + U2)+(S1-S2)
U1和U2是区域直径之和与未知的高低水平。
S1和S2是区域直径与高低标准溶液的总和。
“ I”是稀释比例。
5.6.5极限:根据各自的产品规格。
5.6.6样品的效价可通过表达式
%效价x样品的假定效价
                            100 计算得出

6.0缩写

6.1 SOP –标准操作程序
6.2°C –摄氏度
6.3 M –道德
6.4 G –克
6.5 Ml –毫升
6.6 U –单位
6.7 ATCC –美**文化类型收集
6.8%–百分比